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當前位置:首頁新聞資訊多抗制備基于機體免疫系統對抗原的識別和免疫應答過程

多抗制備基于機體免疫系統對抗原的識別和免疫應答過程

更新時間:2025-07-10點擊次數:41
  多克隆抗體(polyclonal antibody,多抗)是由多種不同的 B 細胞克隆針對抗原物質產生的多樣化抗體混合物。多抗制備主要基于機體免疫系統對抗原的識別和免疫應答過程。
 
  當將抗原物質注入動物體(如小鼠、大鼠、兔子等)后,動物的免疫系統會被激活。抗原呈遞細胞(如樹突狀細胞)會攝取、加工抗原,并將其呈遞給輔助性 T 細胞。輔助性 T 細胞被激活后,會釋放細胞因子,刺激 B 細胞的增殖和分化。B 細胞表面的 B 細胞受體能夠特異性地識別抗原的不同表位。每一個 B 細胞克隆只能識別抗原上的一種特定表位,在抗原的刺激以及輔助性 T 細胞的輔助下,這些 B 細胞會大量增殖并分化為漿細胞。漿細胞則可以分泌針對相應表位的抗體,這些來自不同 B 細胞克隆的抗體混合在一起,就形成了多克隆抗體。
 
  由于抗原通常具有多個不同的表位,所以能夠引發機體產生針對多個表位的抗體。這些抗體在特異性、親和力等方面存在差異,但共同作用于抗原,可以從不同角度對抗原進行識別和結合,從而實現對抗原的檢測、定位或中和等功能。
多克隆抗體
 
  多抗制備的測定步驟:
 
  1.抗原準備:選擇合適的抗原,如純化蛋白、肽段、重組抗原等,確保其純度和免疫原性。
 
  2.免疫動物:
 
  -選擇動物:通常選用兔子、山羊等,兔子是多抗制備的,因其體積大,每次可抽取較多血清,且反應良好。
 
  -初次免疫:將抗原與弗氏佐劑等比例混合,充分乳化后,在動物背部多點皮下注射或肌肉注射。
 
  -加強免疫:初次免疫后間隔一定時間(如2~4周),用抗原與弗氏佐劑乳化后進行多次加強免疫,以提高抗體效價。
 
  3.采血與血清分離:
 
  -采血:在免疫過程中定期采血,檢測抗體效價。采血可在加強免疫后達到預期效價時進行,可采用頸動脈放血等方式獲取大量抗血清。
 
  -血清分離:采集的血液在37℃烘箱放置一段時間后,轉移到4℃沉淀過夜,離心后收集上清即為血清,也可自然析出血清。
 
  4.抗體純化:
 
  -親和純化:如蛋白A/G親和純化可富集免疫球蛋白G(IgG),除去大量非特異性蛋白,但可能仍有非特異性IgG殘留;抗原特異性親和純化可進一步去除非特異性IgG組分,富集特異性免疫球蛋白。
 
  -其他純化方法:還可結合離子交換層析、凝膠過濾層析等方法提高抗體純度。
 
  5.抗體鑒定:
 
  -效價測定:常用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定抗體效價,即將抗體倍比稀釋后與抗原反應,通過檢測吸光值確定效價。
 
  -特異性檢測:可通過免疫印跡(Western Blot)、免疫組織化學等方法檢測抗體對目標抗原的特異性識別能力。

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